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【下载新版V5.9.1】生化培养箱在多管发酵法的应用

本文摘要:1.多管发酵法  初烘烤实验烘烤管内装有单倍或三倍乳糖蛋白胨培养液,并在内长条有小玻璃管。

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1.多管发酵法  初烘烤实验烘烤管内装有单倍或三倍乳糖蛋白胨培养液,并在内长条有小玻璃管。每个样品用三个有所不同的水样量疫苗,同一疫苗水样量要有五管,将水样分别疫苗到装有乳糖蛋白胨培养液的烘烤管中,在37℃0.5℃下培育24h2h。

乳糖能起自由选择起到,因为很多细菌无法烘烤乳糖,而大肠菌群能烘烤乳糖并产酸产气。培养液中重新加入溴甲酚紫作为酸度指示剂,细菌产酸后,培养液即由原本的紫色变为黄色。

产酸产气的烘烤管指出试验阳性,如在推倒管内产气不显著,可轻拍烘烤管,有小气泡照亮为阳性。  始烘烤实验严重波动初烘烤试验阳性结果的烘烤管,用3mm疫苗环将培育物(2-3环)桥接到EC培养液中,在44.5℃0.5℃下培育24h2h(提升培育温度可导致有利于来自自然环境的大肠菌群的生长)。培育后立刻仔细观察,烘烤管产气则证实为粪大肠菌群阳性。

  2.滤膜法  滤膜是一种微孔性滤膜,孔径0.45m。将水样流经已消毒的放置滤膜的过滤器中,经过抽滤,细菌即被囤积在膜上,然后将滤膜贴于M-FC培养基上,在44.5℃0.5℃下培育24h2h。粪大肠菌群菌落在M-FC培养基上呈圆形蓝色或蓝绿色,其他非粪大肠菌群菌落成灰色、淡黄色或无色。

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长时间情况下,由于温度和玫瑰酸盐试剂的选择性起到,在M-FC培养基上很少看到非粪大肠菌菌落。  两种方法的注意事项  1.培育温度的拒绝总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外,在自然环境中的水与土壤中也常常不存在,但此等在自然环境中生活的大肠菌群培育的合适温度为25℃左右,如在37℃培育则仍可生长,但如将培育温度再行增高至44.5℃,则仍然生长,而必要来自粪便的大肠菌群细菌,习惯于37℃左右生长,如将培育温度增高至44.5℃仍可之后生长。

因此,能用提升培育温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分,两种方法也都基于此理。将疫苗好的样品或装有滤膜的培养基放进生化培养箱时,箱内温度一定要超过所拒绝的温度(44.50.5℃)时,方可放进。

如用恒温水浴箱时,其水面要低于接种物面,敲滤膜的培养皿要沉到水浴箱底部。  2.加氯水样的处置经氯处置消毒过的水样,水中所含一定量的余氯,使大肠菌群正处于损毁或不受诱导状态,在收集水样时应提早在取样瓶中加硫代硫酸钠,硫代硫酸钠可以干氯,使损毁的细菌以求衰退与修缮,从而尽量避免计数结果偏高甚至假阴性的现象。此外余氯对滤膜法培育的细菌其抑制作用最为显著,所以抽滤时应付水样展开大量无菌水溶解,以增加余氯的残余。


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